孔径均一的整体柱用于分离纯化-
目前所使用的大部分层析柱都是填充柱，即将做好的微球介质填充到柱管中。这种用微球介质填充的层析柱容易放大，稳定，重复性好等优点，已被广泛地用于生物制药分离纯化，如抗l生素，-，抗l体等-分离纯化都是采用这种方法。但这种方法用于分离纯化-有局限性，主要是由于具有-孔结构且机械强度好的介质微球制备技术难度大。而整体柱由于具有孔径大、孔隙率大、通透性好、机械强度高、压力低、高通量等优点，有利于-及-类疫l苗生物大分子的分离纯化。
整体柱制备方法是把单体和致孔剂混合液填充到柱子中，经过升温产生聚合反应，在反应过程利用相分离原理形成贯穿孔结构整体柱，由于整个柱子是一个整体，可以保持较高的孔隙率和较高的机械强度。由于整体柱的孔隙率大, 可以减小流动相阻力和路径扩散, 提高可及比表面积及-吸附载量，从而提高-的分离效率。整体柱层析已被证明是-及-类大分子比较理想的分离方法。但目前整体柱制备方法有很大的局限性，因为在整体柱合成过程中，其孔径大小是通过反应过程中相分离来决定的，而相分离容易受到温度，反应速度等影响，因此孔径大小不容易控制，导致柱间批次的稳定性和重复性差，而且不容易制备能满足生产需求的大尺寸整体柱。这些因素是整体柱不能广泛用于-的分离纯化的主要原因。
分离纯化抗l体的目的。野l生型protein a蛋白是金黄色葡l萄球菌细胞壁锚钉蛋白。三维空间上，抗l体fc端ch2-ch3区域与protein a蛋白b结构域上两条反相平行的α螺旋结构相互结合。因此protein a与抗l体分子-是与igg1、igg2、igg4有特-结合，使得抗l体分子与发酵液中不具fc端结构的杂质如宿主蛋白与-等有效分离，进而达到纯化目的。protein a 亲和层析介质是通过把proteina 配基偶联到微球介质上制备而成的。因为protein a配基与目标抗l体的作用的专一性，因此亲和层析的分离纯化工艺和方法与抗l体样品杂质含量和种类多少影响不大，使用protein a 介质一步纯化目标抗l体就可以达到95%以上纯度，回收率达到90%以上。亲和纯化效率也基本不受杂质多少影响，而其它分离模式如离子交换，疏水，分子筛等的分离工艺方法及效率大多取决于与目的蛋白同时存在的杂质种类和含量。因此，只要样品杂质不同，即使是纯化同样的目标生物分子，采用的分离工艺和方法就不同。以重组-分离纯化为例，不同厂家虽然生产的是同一目标-，但采用分离纯化方法完全不一样，主要原因就是每家生产的-杂质组成和含量不一样，因此需要不同的纯化工艺。而比-分子量，结构更复杂的抗l体基本可以采用标准化的三步曲，主要原因就是protein a 亲和介质的出现大大简化抗l体的分离纯化工艺，但protein a 价格昂贵让抗l体生产厂家爱恨交加。
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